1)LUMINEX應(yīng)用于哪些領(lǐng)域?生物醫(yī)學(xué)研究,生物標(biāo)記物開發(fā),臨床檢測等領(lǐng)域。Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個(gè)蛋白。從各種細(xì)胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達(dá)信息?檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前比較高可以達(dá)到50個(gè)左右,基因檢測比較高達(dá)500個(gè)。5)如何保證檢測結(jié)果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產(chǎn)品經(jīng)過了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。同時(shí),我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗(yàn)、嚴(yán)格的操作程序和質(zhì)量控制體系。6)客戶自己提供抗體,是否可以進(jìn)行LUMINEX檢測?Luminex和ELISA檢測試劑都需要兩個(gè)配套的特異性抗體。我們公司具有開發(fā)Luminex試劑盒的經(jīng)驗(yàn)。但是,需要一系列的開發(fā)工作才能保證結(jié)果的特異性、重復(fù)性和可靠性。LabEx多因子檢測技術(shù)(包括luminex、MSD等),所需樣本量少,檢測指標(biāo)豐富。mtor信號通路
Luminex:應(yīng)用微球和流式細(xì)胞儀的原理,微球內(nèi)部含有三種免疫熒光,通過熒光不同的比例可以區(qū)分500種不同的微球。每種微球可以用來檢測一種不同的蛋白或基因。因此,利用微球技術(shù),可以同時(shí)檢測高達(dá)500個(gè)蛋白或基因。Luminex技術(shù)的測量結(jié)果在準(zhǔn)確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達(dá)到相似的水平。Luminex應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對不同目標(biāo)分子的特異性抗體,不同的微球在一定程度上可以自由組合,這樣在一次實(shí)驗(yàn)中可以同時(shí)完成多個(gè)目標(biāo)分子的分析。多目標(biāo)分子的同時(shí)測定可以**減少生物樣品的消耗量,節(jié)省成本和測定時(shí)間,并且使多種目標(biāo)分子之間相關(guān)性的分析更加準(zhǔn)確。目前,Luminex試劑盒已經(jīng)可以檢測500多種蛋白質(zhì)分子,包括細(xì)胞因子、***、自身抗體、**標(biāo)志物等。線粒體信號通路本panel可檢測因子:IL-9,IL-15,IL-17A/F,IL-27p28/IL-30,IL-33,IP-10,MCP-1,MIP-1α,MIP-2 種屬:Mouse。
酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(Elispot)特點(diǎn):酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細(xì)胞水平檢測細(xì)胞因子的分泌情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在96孔培養(yǎng)板上進(jìn)行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。(由于涉及到細(xì)胞培養(yǎng)的過程,對單克隆抗體的要求要遠(yuǎn)高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點(diǎn)。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細(xì)胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細(xì)胞以及抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)。
Luminex液相懸浮芯片是基于高通量微孔板的多重檢測抗體芯片技術(shù)。其基本原理是將高度特異的捕獲單克隆抗體偶聯(lián)到不同熒光標(biāo)記的磁珠上,將不同種類磁珠混合后懸浮于96孔微孔板中。在檢測時(shí),一束激光照射磁珠上的熒光,識別磁珠標(biāo)記的捕獲抗體,從而獲知該磁珠可檢測哪種細(xì)胞因子,從而實(shí)現(xiàn)“定性”作用。進(jìn)一步,通過加入生物素標(biāo)記的高親和配對檢測抗體,同步識別磁珠抓取的目標(biāo)細(xì)胞因子,形成“三明治”結(jié)構(gòu),并加入SA-PE偶聯(lián)上生物素,通過另一束激光照射進(jìn)行信號放大檢測,實(shí)現(xiàn)“定量”作用。本panel可檢測以下因子:Adiponectin,sE-Selectin,sICAM-1 種屬:Rat。
MSD經(jīng)典10因子推薦:中檢院《CAR-T細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》中提到,使用MSD技術(shù)檢測CAR-T細(xì)胞醫(yī)治后樣本中細(xì)胞因子表達(dá)來評估藥物的安全性和有效性。MSD技術(shù)-電化學(xué)發(fā)光和點(diǎn)陣技術(shù)MESOSCALEDISCOVERY公司的ECL(基于石墨微孔板的電化學(xué)發(fā)光免疫分析)技術(shù)是基于ELISA基本原理的升級,在板底通電從而激發(fā)標(biāo)記物SULFO-TAG發(fā)光并由CCDCamera進(jìn)行信號采集;MSDECL技術(shù)提高免疫分析的靈敏度,延伸了線性范圍。MSD通過點(diǎn)陣技術(shù),在96孔石墨電極板里可實(shí)現(xiàn)10個(gè)指標(biāo)每孔的檢測,同時(shí)實(shí)現(xiàn)多個(gè)指標(biāo)定量。MSD技術(shù)獨(dú)具一格的“六合一”特點(diǎn):亞fg/ml靈敏度,低背景,多靶點(diǎn)檢測,6個(gè)數(shù)量級線性范圍,適用于不同樣本基質(zhì)(血清/血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清,腦脊液,尿液,組織勻漿,細(xì)胞裂解液)(人/猴子/小鼠/大鼠),5-25ul微量樣本檢測。LabEx提供V-PLEX人、小鼠、大鼠:炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、TH1/TH2通路重要指標(biāo)多因子組合檢測限。試劑我們提供;檢測我們來做,助您的時(shí)間更有價(jià)值!本panel可檢測以下因子:BDNF,FGF-21,Ghrelin (total),Glucagon,Leptin 種屬:Mouse。流式細(xì)胞圖怎么分析
本panel可檢測以下因子:IP-10,KC/GRO,MCP-1,MIP-1α,MIP-1β,MIP-2,MIP-3α 種屬:Mouse。mtor信號通路
產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些?如何解決?1)、抗體孵育時(shí)間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是尤其重要的一條。2)、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。3)、內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;4)、非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;5)、DAB孵育時(shí)間過長或濃度過高;6)、PBS沖洗不充分,殘留抗體結(jié)果增強(qiáng)著色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要;7)、標(biāo)本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。mtor信號通路
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