多因子高通量檢測

來源: 發(fā)布時間:2022-11-11

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酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Elispot)特點:酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。實驗設(shè)計在96孔培養(yǎng)板上進行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細胞分泌的細胞因子。(由于涉及到細胞培養(yǎng)的過程,對單克隆抗體的要求要遠高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細胞以及抗原刺激物進行培養(yǎng)。多因子高通量檢測蛋白分析實驗技術(shù)——MSD超敏電化學(xué)發(fā)光平臺。

酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)優(yōu)勢:靈敏度高該測定法的靈敏度來自作為報告基團的酶。眾所周知,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現(xiàn)了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。特異性強其特異性來自抗體或抗原的選擇性。抗原抗體的結(jié)合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點之間。由千兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系,所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。

細胞因子在腫塊物醫(yī)治中的作用Il-2:增強NK細胞和CD8T細胞功能;增加血管通透性IL-3:增強腫塊物抗原呈遞IL-4:增強嗜酸性粒細胞功能和T細胞活化IL-6:增強T細胞和B細胞功能;抑制IL-6可減少淋巴增生IL-7:增強T細胞功能IL-10:抑制腫塊物抗原呈遞IL-12:增強Th1免疫和細胞毒性;抑制血管生成IL-13:抑制對病毒性腫塊物的細胞毒性IL-15:增強細胞毒性IL-18:增強Th1免疫和細胞毒性;抑制血管生成M-CSF:增強巨噬細胞功能GM-CSF:增強腫塊物抗原呈遞IFN-α:增強腫塊物抗原呈遞和細胞毒性IFN-γ:增強腫塊物抗原呈遞和細胞毒性TNF-α:誘導(dǎo)腫塊物細胞凋亡TRAIL:誘導(dǎo)腫塊物細胞凋亡FLT3ligand:刺激樹突狀細胞和NK細胞功能Lymphotactin:增強T細胞募集TGF-β:抑制T細胞效應(yīng)器功能LabEx 免疫組化服務(wù):包括DAB染色、HE染色、Masson染色、免疫熒光(IF)。

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LabEx多因子檢測作為高效的檢測手段,被廣泛應(yīng)用在多種疾病研究中。多因子高通量檢測

酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行的技術(shù)?;驹恚核捎每乖c抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于訂量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。測量時,抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后,再加上酶的相應(yīng)底物,即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標(biāo)儀)加以測定。其方法簡單,方便迅速,特異性強。多因子高通量檢測

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