選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素，包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質粒DNA轉染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉染。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力，通常比其他細胞類型更不容易受到轉染。非脂質體試劑在轉染人原代細胞方面優(yōu)于脂質體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS。相比之下，據(jù)報道，基于脂質體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質體試劑產(chǎn)生更高的轉染效率。核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。廣州轉染試劑好用
核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中，使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響，轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發(fā)現(xiàn)是，轉染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關。例如，2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產(chǎn)生比較好的轉染效率，而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發(fā)現(xiàn)，即在一系列組合中使用比較高轉染試劑與DNA比體積測試時，轉染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉染試劑量會導致不必要的細胞毒性，從而降低整體轉染結果。因此，確定合適的核酸與試劑比例是啟動新的轉染研究以實現(xiàn)高轉染效率和低細胞毒性的重要步驟。吉林siRNA轉染試劑轉染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉染效率的潛在因素。
作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉染。另一個有趣的觀察結果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉染效率的比較好培養(yǎng)溫度。這種現(xiàn)象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養(yǎng)溫度。同時，在轉染原代細胞時，化學轉染似乎不如病毒和物理轉染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉染試劑進行轉染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數(shù)轉染試劑在轉染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。
轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里，轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑，可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外，轉染可以作為基因***中的策略之一，用于***無法***的遺傳性遺傳病。***，生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中，這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA，如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩(wěn)定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩(wěn)定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中，或在宿主核中作為染色體外元件維持一個外源載體來維持轉基因的長期表達。該轉基因可然后通過細胞的復制進行本構性表達。相比之下，瞬時轉染不需要將核酸整合到宿主細胞基因組中。核酸可以以質粒的形式或寡核苷酸的形式轉染。因此，隨著宿主細胞的復制，轉基因表達**終會丟失。瞬時轉染通常用于短期研究，以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下，穩(wěn)定轉染在需要大規(guī)模蛋白質生產(chǎn)的長期遺傳和藥理學研究中很有用。納米顆?？梢詤⑴c內(nèi)體途徑，并可以通過細胞質將DNA運輸?shù)郊毎恕?/p>
質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)，它是熒光共振能量轉移研究質子泵抑制劑的替代方法。多個質粒的共轉染也可以應用于轉染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。一項與抗血管生成基因傳遞高度相關的發(fā)現(xiàn)是，陽離子脂質體（CLs）選擇性地靶向的血管系統(tǒng)。難轉細胞轉染試劑優(yōu)惠
脂質顆粒的加入導致內(nèi)體DNA釋放增加。廣州轉染試劑好用
RNA和信使RNA與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比，RNA轉染可能產(chǎn)生更高的轉染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下，RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質。然而，RNA轉染后，蛋白質表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對較差，因此在細胞內(nèi)運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調控轉錄后基因調控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉錄后調控。與miRNAs和piRNAs類似，siRNA也在調控轉錄后基因表達中發(fā)揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp，可表達為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結合mRNA上的互補序列來降解它。廣州轉染試劑好用