湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內(nèi)容，依托公司深耕生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)LC-MS檢測HCPs方法進(jìn)行了評(píng)價(jià)與優(yōu)化。同時(shí)通過對(duì)LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質(zhì)控，建立起一套抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、結(jié)果真實(shí)可靠的LC-MS檢測HCPs標(biāo)準(zhǔn)方法。檢測技術(shù)平臺(tái)分成樣品制備、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗(yàn)證四部分，已使用LC-MS平臺(tái)進(jìn)行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細(xì)胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。 不同培養(yǎng)工藝和產(chǎn)物表達(dá)影響 HCP 的數(shù)量和生化復(fù)雜性。定制化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測...

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）作為生物制品中來源于細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，具有明顯的異質(zhì)性特征。其復(fù)雜性體現(xiàn)在三個(gè)方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內(nèi)及分泌蛋白，涉及關(guān)鍵生理功能，具有涵蓋區(qū)間大的等電點(diǎn)（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株、培養(yǎng)條件）誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾（PTM），導(dǎo)致HCP總量與生化復(fù)雜性增加；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會(huì)選擇性殘留特定HCP，且產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達(dá)）直接影響HCP殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測方案是準(zhǔn)確監(jiān)控宿主細(xì)胞蛋白殘留的關(guān)鍵。 ...

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是樣品質(zhì)量。HCP檢測貫穿生物制品生產(chǎn)的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個(gè)步驟。在不同樣品基質(zhì)下，HCP檢測可能存在巨大差異。例如，對(duì)于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對(duì)HCP項(xiàng)目進(jìn)行檢測，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進(jìn)行檢測。此外樣品的收集、處理和保存方式對(duì)檢測結(jié)果至關(guān)重要。不正確的處理可能導(dǎo)致蛋白降解或變性，從而影響檢測結(jié)果。例如，若采用歷史批樣品作為內(nèi)部質(zhì)控品，應(yīng)結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。 不同技術(shù)平臺(tái)獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>...

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA定制化開發(fā)平臺(tái)需要具備完善的開發(fā)體系，可靠的技術(shù)平臺(tái)，專業(yè)的開發(fā)團(tuán)隊(duì)，以實(shí)現(xiàn)長期穩(wěn)定供應(yīng)符合法規(guī)要求的試劑盒。其中校準(zhǔn)品作為關(guān)鍵原材料，其良好的穩(wěn)定性和溯源保障對(duì)生命周期至關(guān)重要。為確保校準(zhǔn)品的穩(wěn)定，一般采用凍干工藝制備校準(zhǔn)品，用單因素方差分析方法對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行均一性評(píng)估，采用法規(guī)規(guī)定的蛋白定量方法進(jìn)行校準(zhǔn)品的賦值，并溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品（如有）或BSA國家標(biāo)準(zhǔn)品。其次，由于HCPs是復(fù)雜的多分析物，為制備盡可能高覆蓋率的抗體，覆蓋工藝下特有的高風(fēng)險(xiǎn)HCPs，需采用可靠的免疫策略。得到符合性能要求的抗體后，需采用經(jīng)過驗(yàn)證的可靠的2D或LC-MS方法進(jìn)行抗體覆蓋率的...

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是操作規(guī)范。一方面，實(shí)驗(yàn)人員的專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)對(duì)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有很大影響。熟練的實(shí)驗(yàn)人員能夠準(zhǔn)確地進(jìn)行樣品處理、試劑配制和儀器操作，減少人為誤差。另一方面，一個(gè)合理的HCP檢測方法，在開發(fā)及應(yīng)用時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮操作的合理變動(dòng)區(qū)間（即耐用性）并設(shè)置相質(zhì)控，從程序上盡量消除人為誤差對(duì)結(jié)果的影響。此外，嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP）是確保檢測結(jié)果可靠性的關(guān)鍵。操作步驟的不規(guī)范可能導(dǎo)致結(jié)果的重復(fù)性差或誤差增大。目前，湖州申科已正式推出全自動(dòng)化HCP ELISA檢測系統(tǒng)，可以完成從樣品制備、孵育、洗板至數(shù)據(jù)采集等一系列操作，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS...

HCP是由宿主細(xì)胞（通常是哺乳動(dòng)物細(xì)胞或微生物）產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)具有潛在的風(fēng)險(xiǎn)，可能會(huì)影響藥物的安全性和有效性。因此，HCP殘留量是生物藥物中一個(gè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性，要求在藥物的開發(fā)和生產(chǎn)階段對(duì)HCP的存在進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的純度在逐漸提高，HCPs總量和種類卻在持續(xù)降低，這使得對(duì)HCP的分析和監(jiān)測工作變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，開發(fā)高效的HCP富集材料和技術(shù)變得尤為關(guān)鍵。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為生物制品（如單抗、融合蛋白等）中HCP的富集和去除高豐度蛋白而設(shè)計(jì)，利用磁珠法構(gòu)建了一個(gè)多樣化且復(fù)雜的親和配體庫，旨在高效地識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白。其...

各國法規(guī)要求必須對(duì)生物藥品進(jìn)行分析和純化，以將宿主細(xì)胞蛋白HCP降低到可接受的水平；即使終產(chǎn)品中痕量的宿主細(xì)胞蛋白HCP到達(dá)患者體內(nèi)，尚不清楚特定的殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會(huì)影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關(guān)于HCP的限量標(biāo)準(zhǔn)，美國藥典推薦值為終產(chǎn)品的HCP水平1-100 ng/mg；中國藥典各論中E.coli菌體HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.10% (1000 ng/mg)，CHO細(xì)胞HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.05% (500 ng/mg)，假單胞菌HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.02% (200 ng/mg)。 湖州申科構(gòu)建 HCP ELISA 檢測全流程平臺(tái)，確保試劑盒性能可靠。通用型宿主細(xì)...

HEK 293細(xì)胞來源于人胚腎細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域，如病毒載體的生產(chǎn)等。盡管生物制品會(huì)經(jīng)過一系列純化工藝以去除相關(guān)雜質(zhì)，但殘留的微量宿主細(xì)胞蛋白（HCP）仍會(huì)引發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。因此，需要對(duì)生產(chǎn)工藝中殘留的HEK 293 HCP進(jìn)行定量檢測，使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物HEK 293 HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）適用于HEK 293和HEK 293T來源的生物制品（重組蛋白類、細(xì)胞和基因治療類等）中宿主細(xì)胞蛋白的定量檢測。試劑盒檢測步驟少，快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。 湖州申科HCP試劑盒開發(fā)經(jīng)抗原表征、抗體制備到體系驗(yàn)證，全流程符合法...

MDCK（Madin-Darby Canine Kidney，馬丁達(dá)比犬腎上皮細(xì)胞）細(xì)胞系是一種來源于犬腎的長久性細(xì)胞系，其被普遍用作流感病毒增殖與純化、流感疫苗生產(chǎn)等過程中的細(xì)胞基質(zhì)。基于其易感性、高產(chǎn)高滴度、無適應(yīng)性突變、易馴化等優(yōu)勢，MDCK細(xì)胞成為公認(rèn)的適合于流感病毒毒株分離和流感疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞系。與其他產(chǎn)品雜質(zhì)一樣，MDCK宿主殘留蛋白（HCP）可能對(duì)生物制品的安全性和有效性產(chǎn)生不利影響，因此在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等過程中需要對(duì)其進(jìn)行定量研究并進(jìn)行嚴(yán)格控制。SHENTEK? MDCK HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發(fā)的、具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、實(shí)現(xiàn)關(guān)...

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，憑借其超高的分辨率與準(zhǔn)確度在生物分析領(lǐng)域占據(jù)重要地位。該技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測，還可通過建立專屬蛋白質(zhì)譜庫準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關(guān)鍵支撐。不過，其應(yīng)用過程中面臨的關(guān)鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規(guī)范中對(duì)產(chǎn)品放行檢測的嚴(yán)格要求。在質(zhì)譜檢測環(huán)節(jié)，通過引入表征清晰的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，能夠準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開發(fā)產(chǎn)品專屬的 HCP ELISA 檢測方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化...

湖州申科生物依托高分辨質(zhì)譜技術(shù)推出宿主細(xì)胞蛋白定制化檢測服務(wù)組合，覆蓋生物制品殘留蛋白分析需求。該平臺(tái)提供四類服務(wù)：HCP蛋白檢測定制化服務(wù)；通過ELISA、雙向電泳（2D）及LC-MS/MS技術(shù)，支持常規(guī)生物制品檢測、高危及工藝相關(guān)蛋白數(shù)據(jù)庫構(gòu)建以及特殊生物制品分析；抗體覆蓋率服務(wù)采用自主研發(fā)的IMBS技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜，準(zhǔn)確評(píng)估ELISA試劑盒對(duì)工程細(xì)胞HCP的捕獲能力，并完成校準(zhǔn)品表征；靶向HCP檢測專注于高風(fēng)險(xiǎn)殘留蛋白的方法開發(fā)；同時(shí)提供蛋白種屬鑒定服務(wù)，利用LC-MS技術(shù)溯源樣品中的物種特異性肽段。該服務(wù)體系通過多技術(shù)聯(lián)用與深度定制化策略，滿足從基礎(chǔ)篩查到工藝關(guān)鍵雜質(zhì)監(jiān)控的全維度需求。...

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）作為生物制品中來源于細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，具有明顯的異質(zhì)性特征。其復(fù)雜性體現(xiàn)在三個(gè)方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內(nèi)及分泌蛋白，涉及關(guān)鍵生理功能，具有涵蓋區(qū)間大的等電點(diǎn)（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株、培養(yǎng)條件）誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾（PTM），導(dǎo)致HCP總量與生化復(fù)雜性增加；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會(huì)選擇性殘留特定HCP，且產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達(dá)）直接影響HCP殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測方案是準(zhǔn)確監(jiān)控宿主細(xì)胞蛋白殘留的關(guān)鍵。 ...

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是樣品質(zhì)量。HCP檢測貫穿生物制品生產(chǎn)的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個(gè)步驟。在不同樣品基質(zhì)下，HCP檢測可能存在巨大差異。例如，對(duì)于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對(duì)HCP項(xiàng)目進(jìn)行檢測，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進(jìn)行檢測。此外樣品的收集、處理和保存方式對(duì)檢測結(jié)果至關(guān)重要。不正確的處理可能導(dǎo)致蛋白降解或變性，從而影響檢測結(jié)果。例如，若采用歷史批樣品作為內(nèi)部質(zhì)控品，應(yīng)結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。 臨床 III 期及商業(yè)化生產(chǎn)階段，法規(guī)推薦用定制化 HCP ELISA 試劑盒保障...

湖州申科生物致力于提供符合嚴(yán)格法規(guī)要求的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA檢測試劑盒。為確保產(chǎn)品滿足生物制品（如抗體藥、疫苗）申報(bào)（如IND/BLA）的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)，申科構(gòu)建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量體系：整個(gè)開發(fā)過程嚴(yán)格遵循ISO 13485質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并滿足用戶審計(jì)要求。其開發(fā)流程明確包含三個(gè)關(guān)鍵階段：①HCP殘留定量檢測參考品開發(fā)：關(guān)鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品，涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩(wěn)定性考察等，確保檢測的準(zhǔn)確性與代表性。②高質(zhì)量大批量抗體制備：通過優(yōu)化的HCP抗原動(dòng)物免疫策略，結(jié)合嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目贵w質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（如建立標(biāo)準(zhǔn)、覆蓋率驗(yàn)證）和穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)具有高特異性和廣覆蓋度的...

湖州申科在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA檢測技術(shù)領(lǐng)域擁有深厚的積累，已成功構(gòu)建高質(zhì)量、全流程的自有開發(fā)平臺(tái)，覆蓋HCP檢測試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：基于合規(guī)平臺(tái)的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)確?？乖瓗斓拇硇?。②動(dòng)物免疫與抗體制備：依托自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，控制免疫原設(shè)計(jì)與動(dòng)物免疫過程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開發(fā)與驗(yàn)證：憑借成熟的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測體系，并嚴(yán)格遵循GMP標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測變異性。...

全球快速增長的抗體、蛋白類藥物等生物藥由相應(yīng)工程細(xì)胞生產(chǎn)。生物制品藥物生產(chǎn)過程中的宿主內(nèi)源性蛋白，被稱為宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）會(huì)隨著不同工藝流程部分殘留在藥物中。宿主細(xì)胞殘留蛋白作為外源蛋白可能會(huì)在不同程度上引發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致過敏反應(yīng)或其它不良反應(yīng)；另外還有一些殘留HCPs具有蛋白酶或脂酶的活性，可能導(dǎo)致蛋白藥物或輔料的降解，進(jìn)而增加藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和療效的不穩(wěn)定性?；诖?，對(duì)藥物中HCPs的定性與定量檢測就顯得尤為重要。全球各國藥典如美國藥典，歐洲藥典以及中國藥典都對(duì)HCPs檢測提出了具體要求和標(biāo)準(zhǔn)。 定制化宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測試劑盒抗原校準(zhǔn)...

各國法規(guī)要求必須對(duì)生物藥品進(jìn)行分析和純化，以將宿主細(xì)胞蛋白HCP降低到可接受的水平；即使終產(chǎn)品中痕量的宿主細(xì)胞蛋白HCP到達(dá)患者體內(nèi)，尚不清楚特定的殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會(huì)影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關(guān)于HCP的限量標(biāo)準(zhǔn)，美國藥典推薦值為終產(chǎn)品的HCP水平1-100 ng/mg；中國藥典各論中E.coli菌體HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.10% (1000 ng/mg)，CHO細(xì)胞HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.05% (500 ng/mg)，假單胞菌HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.02% (200 ng/mg)。 湖州申科可根據(jù)客戶要求，快速定制符合用戶生產(chǎn)工藝的HCP商業(yè)化檢測試劑盒，滿足用戶...

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，憑借其超高的分辨率與準(zhǔn)確度在生物分析領(lǐng)域占據(jù)重要地位。該技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測，還可通過建立專屬蛋白質(zhì)譜庫準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關(guān)鍵支撐。不過，其應(yīng)用過程中面臨的關(guān)鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規(guī)范中對(duì)產(chǎn)品放行檢測的嚴(yán)格要求。在質(zhì)譜檢測環(huán)節(jié)，通過引入表征清晰的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，能夠準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開發(fā)產(chǎn)品專屬的 HCP ELISA 檢測方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化...

湖州申科在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA檢測技術(shù)領(lǐng)域擁有深厚的積累，已成功構(gòu)建高質(zhì)量、全流程的自有開發(fā)平臺(tái)，覆蓋HCP檢測試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：基于合規(guī)平臺(tái)的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)確保抗原庫的代表性。②動(dòng)物免疫與抗體制備：依托自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，控制免疫原設(shè)計(jì)與動(dòng)物免疫過程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開發(fā)與驗(yàn)證：憑借成熟的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測體系，并嚴(yán)格遵循GMP標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測變異性。...

LC-MS技術(shù)作為生物制品宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測新趨勢，需考慮以下幾點(diǎn)：①穩(wěn)定性：需要HCPs LC-MS檢測流程進(jìn)行驗(yàn)證，全流程都需要有嚴(yán)格的QC控制，確保檢測結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。②可重復(fù)性：不同類型生物制品中HCPs提取效率不同，不同人員操作存在差異，需要在上機(jī)前通過不同方法評(píng)估HCPs的提取效率，避免人為因素造成結(jié)果重復(fù)性差。③準(zhǔn)確度：方法開發(fā)與驗(yàn)證階段，通過設(shè)立內(nèi)標(biāo)與定量算法，根據(jù)內(nèi)標(biāo)響應(yīng)回算得到HCPs的含量，確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白和特殊基質(zhì)會(huì)對(duì)質(zhì)譜檢測產(chǎn)生影響，需要通過前處理手段對(duì)高豐度蛋白或特殊的基質(zhì)進(jìn)行去除，以減少其對(duì)HCPs肽段在質(zhì)譜檢測時(shí)的影響。...

美國藥典<1132>章節(jié) 和歐洲藥典<2.6.34>章節(jié)建議對(duì)于即將進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)的（臨床III期及以后）或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進(jìn)行宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測，原因可能是：①確保檢測方法可以充分覆蓋實(shí)際工藝產(chǎn)生的HCPs，避免漏檢關(guān)鍵雜質(zhì)；②支持更準(zhǔn)確的免疫原性和安全性評(píng)估；③提供真實(shí)的工藝表征數(shù)據(jù)，而非推測數(shù)據(jù)；④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制的方法一致性。此外，對(duì)目前市場上常見的HCP ELISA商業(yè)化試劑盒進(jìn)行了測試，并與HCP ELISA定制化試劑盒進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同商業(yè)化試劑盒檢測同一樣品的檢測值差異大，且準(zhǔn)確性均低于定制化試劑盒，表明定制化試劑盒...

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇？原因之一是來源特定工藝下抗原及校準(zhǔn)品更具代表性。不同生物制品的上游生產(chǎn)工藝，包括培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件，收獲時(shí)機(jī)等差異，均會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的HCPs的蛋白種類、豐度以及蛋白翻譯修飾不同，因此進(jìn)入到下游純化工藝的HCP類型也隨之發(fā)生變化，尤其是與藥物主成分共純化的HCPs會(huì)成為優(yōu)勢蛋白而存在于藥物原液或制劑中。HCP定制化ELISA檢測試劑盒通常選取實(shí)際生產(chǎn)工藝中上游發(fā)酵后的樣品進(jìn)行抗原及校準(zhǔn)品的制備，所制備的校準(zhǔn)品可以較為充分地反映實(shí)際生產(chǎn)工藝中的HCP，減少因抗原校準(zhǔn)品種類不足導(dǎo)致的漏檢以及定量不準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)。 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測對(duì)保障生...

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一是樣品質(zhì)量。HCP檢測貫穿生物制品生產(chǎn)的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個(gè)步驟。在不同樣品基質(zhì)下，HCP檢測可能存在巨大差異。例如，對(duì)于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對(duì)HCP項(xiàng)目進(jìn)行檢測，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進(jìn)行檢測。此外樣品的收集、處理和保存方式對(duì)檢測結(jié)果至關(guān)重要。不正確的處理可能導(dǎo)致蛋白降解或變性，從而影響檢測結(jié)果。例如，若采用歷史批樣品作為內(nèi)部質(zhì)控品，應(yīng)結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。 湖州申科開發(fā)多種宿主 HCP 檢測試劑盒，提供抗體覆蓋率驗(yàn)證服務(wù)。浙江CHO-K1...

磷脂酶B樣蛋白2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），因其強(qiáng)共純化能力、強(qiáng)免疫原性和潛在的酶活性，被認(rèn)為是CHO HCP的關(guān)鍵高風(fēng)險(xiǎn)因子之一。目前行業(yè)建議，需要開發(fā)特定的檢測方法對(duì)這些已知蛋白或特定蛋白進(jìn)行監(jiān)控以更好地把控其潛在風(fēng)險(xiǎn)。SHENTEK? CHO PLBL-2殘留檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發(fā)的、具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的CHO PLBL-2蛋白通用檢測試劑盒。本試劑盒適用于基于CHO表達(dá)系統(tǒng)的生物制品中CHO HCP高風(fēng)險(xiǎn)蛋白PLBL-2的定量檢測。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。 湖州申科 HCP檢測...

美國藥典<1132>章節(jié) 和歐洲藥典<2.6.34>章節(jié)建議對(duì)于即將進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)的（臨床III期及以后）或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進(jìn)行宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測，原因可能是：①確保檢測方法可以充分覆蓋實(shí)際工藝產(chǎn)生的HCPs，避免漏檢關(guān)鍵雜質(zhì)；②支持更準(zhǔn)確的免疫原性和安全性評(píng)估；③提供真實(shí)的工藝表征數(shù)據(jù)，而非推測數(shù)據(jù)；④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制的方法一致性。此外，對(duì)目前市場上常見的HCP ELISA商業(yè)化試劑盒進(jìn)行了測試，并與HCP ELISA定制化試劑盒進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同商業(yè)化試劑盒檢測同一樣品的檢測值差異大，且準(zhǔn)確性均低于定制化試劑盒，表明定制化試劑盒...

按照美國藥典1132章節(jié)的要求，HCPs校準(zhǔn)品需滿足代表性要求，即能覆蓋實(shí)際工藝產(chǎn)品生產(chǎn)中的HCPs。從HCP免疫檢測方法使用目的和預(yù)期風(fēng)險(xiǎn)管理要求考慮，滿足工藝開發(fā)和驗(yàn)證，同時(shí)為了應(yīng)對(duì)下游工藝中潛在的異常工藝失效，或工藝變更需求，建議采用上游發(fā)酵工藝末端，如澄清處理后工藝點(diǎn)的樣本作為HCPs的來源。在實(shí)際制備中，可采用空細(xì)胞或空載細(xì)胞在模擬實(shí)際工藝的預(yù)定條件進(jìn)行采集，通過二維電泳或高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學(xué)方法進(jìn)行模擬工藝和實(shí)際工藝下HCPs的代表性表征分析。越靠近下游HCPs蛋白種類越少，也越接近DS中HCPs，但是其可能無法滿足工藝開發(fā)和驗(yàn)證需求，也無法保證工藝的潛在風(fēng)險(xiǎn)，往往不推薦使...

宿主細(xì)胞蛋白通常是與重要細(xì)胞功能相關(guān)的蛋白，如細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活、細(xì)胞凋亡等，在工藝過程中分泌或因細(xì)胞死亡或裂解而釋放。生產(chǎn)過程中，以下幾個(gè)因素會(huì)主要影響HCP的組成和豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下，潛在的HCP數(shù)量可能非常大，且非所有基因都表達(dá)，某些基因在不同的時(shí)間和條件下表達(dá)；如大腸桿菌約4300個(gè)基因，不同的工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，增加了HCP的總數(shù)和生化復(fù)雜性。有研究表明，如大腸桿菌表達(dá)的蛋白，其不同蛋白之間存在數(shù)量差異，這些差異可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但大多數(shù) (85-90%) 有潛在免疫原性的宿主細(xì)胞蛋白在不同的發(fā)酵過程中...

宿主細(xì)胞蛋白通常是與重要細(xì)胞功能相關(guān)的蛋白，如細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活、細(xì)胞凋亡等，在工藝過程中分泌或因細(xì)胞死亡或裂解而釋放。生產(chǎn)過程中，以下幾個(gè)因素會(huì)主要影響HCP的組成和豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下，潛在的HCP數(shù)量可能非常大，且非所有基因都表達(dá)，某些基因在不同的時(shí)間和條件下表達(dá)；如大腸桿菌約4300個(gè)基因，不同的工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，增加了HCP的總數(shù)和生化復(fù)雜性。有研究表明，如大腸桿菌表達(dá)的蛋白，其不同蛋白之間存在數(shù)量差異，這些差異可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但大多數(shù) (85-90%) 有潛在免疫原性的宿主細(xì)胞蛋白在不同的發(fā)酵過程中...

在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法中， ELISA方法是廣泛應(yīng)用的，并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對(duì)簡單、精度良好，方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)和過程控制；但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結(jié)合，因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關(guān)重要。無論是商品化ELISA試劑盒，還是自制的多克隆抗體，如果抗體的特異性和適用性不夠高，都有可能帶來HCPs漏檢的風(fēng)險(xiǎn)，從而對(duì)生物制品質(zhì)量安全帶來風(fēng)險(xiǎn)。除此之外，ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體，無法針對(duì)性的提供高風(fēng)險(xiǎn)HCPs殘留蛋白真實(shí)存在情況。 不同技術(shù)平臺(tái)獲得的抗體覆蓋率水平...

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評(píng)估：法規(guī)推薦的方法有兩大類：一類是傳統(tǒng)2D-WB法，另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統(tǒng)2D-WB法存在需要蛋白變性，樣品需要前處理（破壞蛋白天然表位）；轉(zhuǎn)膜效率低；易產(chǎn)生非特異性等缺陷，難以反映真實(shí)的覆蓋率水平。湖州申科自主開發(fā)了免疫磁珠捕獲分離技術(shù)（immunomagnetic beads separation，IMBS)，利用免疫磁珠的半液態(tài)性質(zhì)，可以在懸浮的條件下與HCP樣本充分混勻結(jié)合，整個(gè)過程蛋白無需變性，結(jié)合方式與ELISA檢測條件相似，可以獲得更真實(shí)的覆蓋率結(jié)果。 湖州申科宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測試劑盒開發(fā)遵循 ISO 13485 體系，滿...