探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團(tuán),便于標(biāo)記。特點是比活性高,可達(dá)9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測定ELISA方法相似,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,事實上被標(biāo)記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標(biāo)記的。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機(jī)系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)等部分。嘉定區(qū)優(yōu)勢探針維修價格
血凝素與生物素有非常高的親和性,當(dāng)血凝素標(biāo)記上過氧化物酶或堿性磷酸酶,經(jīng)雜交反應(yīng)**終形成探針-生物素-血凝素酶復(fù)合物(ABC法),酶催化底物顯色,觀察結(jié)果。ABC法底物顯色生成不溶物,以便觀測結(jié)果。酶標(biāo)記法復(fù)雜、重復(fù)性差,成本高,但便于運輸、保存,靈敏度與放射物標(biāo)記法相當(dāng)。探針標(biāo)記方法①缺口平移標(biāo)記法。利用的是DNA聚合酶I能修復(fù)DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機(jī)切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同時在3´端修復(fù)加入被標(biāo)記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標(biāo)記均勻,多用于大分子DNA標(biāo)記,(>1000bp比較好),但單鏈DNA、RNA不能用該法標(biāo)記。虹口區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針推薦貨源電子束轟擊樣品表面將產(chǎn)生特征X射線,不同的元素有不同的X射線特征波長和能量。
利用電子探針分析方法可以探知材料樣品的化學(xué)組成以及各元素的重量百分?jǐn)?shù)。分析前要根據(jù)試驗?zāi)康闹苽錁悠?,樣品表面要清潔。用波譜儀分析樣品時要求樣品平整,否則會降低測得的X射線強(qiáng)度。定性分析1 點分析用于測定樣品上某個指定點的化學(xué)成分。下圖是用能譜儀得到的某鋼定點分析結(jié)果。能譜儀中的多道分析器可使樣品中所有元素的特征X射線信號同時檢測和顯示。不像波譜儀那樣要做全部譜掃描,甚至還要更換分光晶體。2 線分析用于測定某種元素沿給定直線分布的情況。方法是將X射線譜儀(波譜儀或能譜儀)固定在所要測量的某元素特征X射線信號(波長或能量)的位置上,把電子束沿著指定的方向做直線軌跡掃描,便可得到該元素沿直線特征X射線強(qiáng)度的變化,從而反映了該元素沿直線的濃度分布情況。改變譜儀的位置,便可得到另一元素的X射線強(qiáng)度分布。下圖為50CrNiMo鋼中夾雜Al2O3的線分析像。可見,在Al2O3夾雜存在的地方,Al的X射線峰較強(qiáng)。
缺口平移法是**常用的探針標(biāo)記法,反應(yīng)體系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大腸桿菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三種三磷酸脫氧核糖核苷酸、一種同位素標(biāo)記的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如圖1。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶I在探針DNA雙鏈分子上隨機(jī)切開若干個缺口(不是切斷DNA或?qū)⑵浣到猓?,然后再借助于DNA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,切去5’末端的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚合酶活性,使32P標(biāo)記的互補(bǔ)核苷酸補(bǔ)入缺口.DNA聚合酶I的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動,DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。由于反應(yīng)體系中含有同位素標(biāo)記的單核苷酸,使新合成的鏈帶有同位素標(biāo)記,所以缺口平移實際上是同位素標(biāo)記的核苷酸取代了原DNA鏈中不帶同位素的同種核苷酸。波譜儀的關(guān)鍵在于怎樣實現(xiàn)將未知的特征譜線與已知元素Z聯(lián)系起來?
電子探針是運用電子所形成的探測針(細(xì)電子束)作為X射線的激發(fā)源來進(jìn)行顯微X射線光譜分析的儀器。分析對象是固體物質(zhì)表面細(xì)小顆?;蛭⑿^(qū)域,**小范圍直徑為1μm。電子探針可測量的化學(xué)成分的元素范圍一般從原子序數(shù)12(Mg)至92(U),原子序數(shù)大于22的元素可在空氣通路的X射線光譜儀上進(jìn)行測量。電子探針的靈敏度低于X射線熒光光譜儀,原因是電子探針X射線的本底值高于后者,但電子探針的***感量比其他儀器都高。此外,后期生產(chǎn)的儀器,可作X射線背散射照相、******照相。能兼作透射電鏡、能進(jìn)行電子衍射、能作電子熒光觀察等。當(dāng)某一X射線光子進(jìn)入計數(shù)管后,管內(nèi)氣體電離,并在電場作用下產(chǎn)生電脈沖信號。閔行區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針五星服務(wù)
把電子顯微鏡和電子探針結(jié)合,可把在顯微鏡下觀察到的顯微組織和元素成分聯(lián)系起來。嘉定區(qū)優(yōu)勢探針維修價格
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi)、原子序數(shù)4以上的所有元素;但是對原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差。常規(guī)分析的典型檢測相對靈敏度為萬分之一,在有些情況下可達(dá)十萬分之一。檢測的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進(jìn)行點、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對原子序數(shù)高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺電子探針儀。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,還能觀察和研究微觀形貌、晶體結(jié)構(gòu)等。嘉定區(qū)優(yōu)勢探針維修價格
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