西安10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析

來源: 發(fā)布時間:2022-07-30

基于10XGeomics動態(tài)微流控技術(shù),利用Tn5轉(zhuǎn)座酶酶切開放染色質(zhì),形成短片段,單細胞ATAC測序在表觀基因組學(xué)水平上,揭示單細胞染色質(zhì)的可及性問題,區(qū)分細胞異質(zhì)性,獲得開放染色質(zhì)的位置、轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點、核小體的調(diào)控區(qū)域和染色質(zhì)狀態(tài)等信息,是單細胞表觀遺傳學(xué)的重要突破:分析每個細胞數(shù)千個獨特的染色質(zhì)開放區(qū)域,識別細胞類型和細胞狀態(tài);識別重要的轉(zhuǎn)錄因子,進行譜系和發(fā)育追蹤;探究驅(qū)動細胞類型和狀態(tài)之間基因表達差異的非編碼序列;探究細胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征等。是當(dāng)前重要的多組學(xué)研究基因表達和表觀遺傳學(xué)的手段。烈冰實驗室包含從樣本處理到測序下機的全套實驗平臺。西安10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析

細胞計數(shù)和活力評估在評估樣本質(zhì)量時,需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力,這一點至關(guān)重要。測定細胞活力有許多種方法,烈冰多年單細胞測序經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數(shù)的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性,取決于我們了解樣本中有多少個細胞。一旦過濾和清洗完成,可采用細胞計數(shù)設(shè)備(如血球計數(shù)器或自動細胞計數(shù)儀)進行定量。這些設(shè)備不但能提供準確的細胞計數(shù),還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。福州單細胞測序數(shù)據(jù)分析ATCG堿基的排列組合構(gòu)成了測序的龐大世界。

相對于Smart-Seq技術(shù)在細胞數(shù)量上的問題,10X平臺普遍提供的細胞數(shù)量都在1000-20000不等的測序細胞量,這個量級的測序細胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的SingleCell群體類型。因此,這兩種技術(shù)對于基于基因表達進行準確細胞分型上,無論是從細胞數(shù)量上來說還是表達檢測可靠性來說,都會更實用。同時依托RandomCellLabel技術(shù),使得其對于NovaSeq、HiSeqXTen、Hiseq4000等設(shè)備存在的Indexhooping現(xiàn)象,相對于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說,影響幾乎可以忽略不計(10XGenomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果,顯示無影響。

單細胞獲得困難,不同組織要求不盡相同難以搞定?烈冰2000+項目消化經(jīng)驗,100+組織類型解離protocol,精心設(shè)計不同組織實驗的解離、細胞懸浮實驗體系,確保單細胞的獲得。凍存樣本無法實驗,珍貴樣本無法使用?烈冰采用國際認可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細胞過濾技術(shù),確保凍存組織使用。珍貴樣本,細胞數(shù)量太少,消化背景雜無法做單細胞?采用國際認可的10XGenomics,BDRhapsody雙平臺模式,根據(jù)樣本實際情況和用戶需求提供客觀有效的實驗方案,細胞量少,背景雜也能做單細胞。單細胞RNA分類精度不足,部分細胞無法細分?烈冰同時采用單細胞蛋白質(zhì)組與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù),真正做到從上游到下游的全流程檢測,確保超高的細胞分類精度。烈冰引進國際主流單細胞和空間轉(zhuǎn)錄組測序平臺,保障細胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細區(qū)域的空間信息。

烈冰科技作為國內(nèi)率先同時擁有10XGenomics和BDRhapsody雙分選平臺的測序服務(wù)商及云計算服務(wù)供應(yīng)商,經(jīng)過多年實戰(zhàn),擁有豐富的單細胞懸液制備和分選經(jīng)驗,實測BDRhapsody對能夠高效捕獲粒細胞。針對不同的分選平臺、建庫方法,實戰(zhàn)總結(jié)搭建出不同的數(shù)據(jù)預(yù)處理工作流程;烈冰科技NovelBrain®生物大數(shù)據(jù)平臺能有效支撐生命科學(xué)研究、醫(yī)療健康等領(lǐng)域?qū)Υ髷?shù)據(jù)分析的需求。高通量測序?qū)嶒炂脚_,包括NovaSeq6000、10XChromiumX、BDFACSMelody、PANNORAMIC數(shù)字切片掃描儀等,配合一支來自海內(nèi)外名校、多學(xué)科交叉型的高素質(zhì)綜合團隊,為您的科學(xué)研究保駕護航。全線搭建10X Genomics Chromium X單細胞實驗測序平臺。北京10X Chromium X單細胞測序商業(yè)化服務(wù)

烈冰一站式單細胞測序服務(wù):立足科學(xué)研究,解碼生命本質(zhì)。西安10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析

10×Genomics單細胞方案要求使用具有較高活性的單細胞懸液。在實際實驗中,我們發(fā)現(xiàn)因為樣本類型和制備單細胞懸液方法的不同,容易出現(xiàn)單細胞懸液中死亡細胞的比例較高的情況。去除單細胞懸液中的死細胞和其他污染物對獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的。這是因為,死亡的細胞易裂解導(dǎo)致其中的RNA釋放出來。這種cell-freeRNA會導(dǎo)致檢測的背景噪聲,并會影響單細胞數(shù)據(jù)的質(zhì)量。因此當(dāng)樣本活性較差時,對細胞懸液中細胞活性檢測后,需要進行一般死細胞去除的工作(一般懸液活性小于70%時考慮此操作),以保證較高的上機捕獲細胞的質(zhì)量。西安10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析

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