Oosight影像分析系統(tǒng)采用液晶偏光成像技術,無需對卵母細胞進行染色,即可實時、清晰、高對比度地進行紡錘體結構和透明帶成像,對ICSI、核移植操作、卵母細胞質(zhì)量評價等有很好的輔助作用。主要應用ICSI:在單精胞漿注射過程中定位初級卵母細胞,避免卵的破裂損傷,增強胚胎的發(fā)育潛能。卵評估:利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進行分級,改善對胚胎的選擇。體外成熟評估:在未成熟卵催化(IVM)過程判斷成熟期,判斷依據(jù)采用的是準確的識別紡錘體,而非不準確的極體。質(zhì)量控制:利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進行分級,改善對胚胎的選擇。核移植:顯著提高核移植的成功率。由于在核摘除的過程可以清楚的看到核質(zhì),使得核移植的成功率增加了80%,并減少了線粒體DNA的摘除。卵冷凍研究:對冷凍的初級卵母細胞進行解凍前和解凍后的定量分析,從而判斷卵的發(fā)育力,改善妊娠率。紡錘體研究:檢測胚胎中紡錘體的發(fā)育過程,確定正常和非正常分裂率(只可用于搭配有培養(yǎng)箱的顯微鏡)??梢詫θ旧w非正常的或非整倍體的胚胎成像,從而選擇***的前體做PGD診斷。透明帶研究:測量卵母細胞的透明帶;準確測量紡錘體和透明帶中分子排列方向的差別變化,判斷紡錘體和透明帶是否處于正常狀態(tài)紡錘體在細胞分裂過程中經(jīng)歷明顯的形態(tài)和結構變化。美國卵母細胞紡錘體Hoechst染料
紡錘體觀測儀在補救ICSI中的應用我們知道,成熟的卵母細胞含有1個極體,也就是***極體。IVF加入精子后,精子會穿透層層障礙**終進入卵子,隨著時間的推移,~6小時后卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極,進而排出第二極體,再往后大約加精后9~16小時,雌雄原核會出現(xiàn),而原核的出現(xiàn)才是受精的標志。但是對于那些沒有受精的卵子,到了原核出現(xiàn)的時間窗發(fā)現(xiàn)沒有受精時再去補救ICSI,往往錯過了卵子的比較好受精時間,因為沒有受精的卵子會在體外老化,即使受精,胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以,我們在加精后的4~6小時,通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,也避免了卵子的老化。當然,偶爾也會出現(xiàn)錯誤補救。文獻報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細胞進行補救,實驗組用紡錘體觀測儀觀察并統(tǒng)計紡錘體的數(shù)目,82.7%含有一個紡錘體,17.3%含有兩個紡錘體,并對含有一個紡錘體的卵母細胞進行補救ICSI;而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體,只對未排出第二極體的卵母細胞進行補救ICSI。結果發(fā)現(xiàn)使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率,降低多原核受精比率。深圳Hamilton Thorne紡錘體液晶偏光補償器紡錘體的異常可能與人類衰老和疾病的發(fā)生有關。
在有絲分裂中,紡錘體負責將姐妹染色單體分離并牽引至細胞兩極,形成兩個遺傳物質(zhì)完全相同的子細胞。而在減數(shù)分裂中,紡錘體則負責將同源染色體分離并牽引至細胞兩極,形成四個遺傳物質(zhì)相似的子細胞。這一過程實現(xiàn)了遺傳信息的重組和配子的形成。其次,在有絲分裂中,紡錘體的形成和分裂過程相對簡單,主要依賴于中心體的復制和分離以及微管的動態(tài)生長和縮短。而在減數(shù)分裂中,紡錘體的形成和分裂過程則更加復雜。在減數(shù)分裂Ⅰ的前期,同源染色體需要發(fā)生配對、聯(lián)會、交換和交叉等過程,這些過程都依賴于紡錘體的微管網(wǎng)絡。此外,在減數(shù)分裂Ⅱ中,姐妹染色單體的分離也需要紡錘體的牽引和定位。此外紡錘體在有絲分裂和減數(shù)分裂中的形態(tài)和大小也存在差異。在有絲分裂中,紡錘體通常呈現(xiàn)出較為規(guī)則的紡錘形狀,而在減數(shù)分裂中,紡錘體的形態(tài)則更加多樣化,可能呈現(xiàn)出不規(guī)則的形狀或分叉的形態(tài)。
紡錘體觀測儀使ICSI更加安全可靠在進行單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI)授精時,**初人們觀察人體內(nèi)成熟的卵母細胞時,通常認為,卵母細胞紡錘**于***極體附近,故傳統(tǒng)的ICSI操作是轉動卵母細胞使其***極**于6點或12點處,然后在3點處注入精子。但是,在大量使用紡錘體觀測儀后發(fā)現(xiàn),***極體并不能很好地預測紡錘體的位置。一項研究提示,在ICSI后,用紡錘體觀測儀觀察紡錘體與***極體的夾角,結果發(fā)現(xiàn)小于30°這組卵母細胞的正常受精率更高。極體在卵周隙中的移動,或者紡錘體在胞質(zhì)中的易位都使兩者的位置關系發(fā)生改變,普通光學顯微鏡下ICSI穿刺部位的選擇,可能會損傷紡錘體和(或)造成染色體的異常。通過紡錘體觀測儀,可以精確地對卵母細胞中紡錘體的位置進行定位,從而避免在ICSI過程中損傷紡錘體,使ICSI更加安全可靠。有文獻報道,在進行ICSI時,觀察到“雙折射紡錘體”的成熟卵母細胞的受精率和質(zhì)量胚胎率***高于未觀察到雙折射紡錘體組。也有學者發(fā)現(xiàn),有些卵母細胞在普通光學顯微鏡下看到是正常的,但在紡錘體觀測儀這個“照妖鏡”下,就能顯出原形,表現(xiàn)為有***極體、但缺乏雙折射的紡錘體,這類卵母細胞ICSI后的受精率和妊娠率極低。紡錘體的形成需要多種蛋白質(zhì)的參與,包括微管相關蛋白和中心體蛋白等。
通過靶向微管蛋白,可以恢復微管的穩(wěn)定性和功能,糾正紡錘體的組裝異常。例如,使用微管穩(wěn)定劑(如紫杉醇)可以穩(wěn)定微管,改善紡錘體的組裝和染色體的分離。此外,通過抑制微管蛋白的異常磷酸化,也可以恢復微管的正常功能。通過恢復染色體穩(wěn)定性,可以減少基因組的不穩(wěn)定性,改善神經(jīng)元的基因表達和功能。例如,使用染色體穩(wěn)定劑(如TOP2抑制劑)可以穩(wěn)定染色體,減少基因組的不穩(wěn)定性。此外,通過修復DNA損傷,也可以恢復染色體的穩(wěn)定性。紡錘體在細胞分裂末期逐漸解體,為細胞質(zhì)分裂做準備。武漢哺乳動物紡錘體改善分級
紡錘體形態(tài)的變化反映了細胞分裂的不同階段。美國卵母細胞紡錘體Hoechst染料
什么是紡錘體?它有多重要?紡錘體主要由微管蛋白組成,微管蛋白是一種含有α和β亞單位的異二聚體。紡錘體不是一成不變的,常常處于組裝和去組裝的動態(tài)變化過程中,一般在細胞分裂的中、后期,紡錘體結構較為典型。紡錘體主要有兩個作用:其一,排列與分配染色體;其二,決定細胞胞質(zhì)分裂的分裂面。紡錘體的完整性決定了染色體分裂過程在時間和空間上的準確性。紡錘體就像一位聰明的大力士的雙手,在細胞分裂過程中,能精細的將等位染色體平均拉向細胞的兩極,確保分裂后的2個子細胞中的染色體數(shù)目相等。但是,如果這個大力士多了一只或幾只手,染色體的分配將紊亂,導致非整倍體。紡錘體損傷的增加多見于高齡婦女,或接觸某些化學物質(zhì)的卵母細胞。在細胞分裂過程中,紡錘體對卵母細胞染色體的平衡、運動、分配、和極體的排出非常關鍵。卵母細胞成熟過程中的兩次減數(shù)分裂形成兩次紡錘體,卵母細胞受精、雌雄原核融合后又會形成有絲分裂紡錘體。美國卵母細胞紡錘體Hoechst染料